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    研域干貨:常見ELISA試劑盒試驗(yàn)技能要點(diǎn)

    發(fā)布時(shí)間: 2019-10-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1397次

    1. 準(zhǔn)備好所有試驗(yàn)額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等;

    2. 依據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確認(rèn)所需試劑的量;

    3. 按闡明書將所用試劑平衡至室溫,制造所需試劑;

    4. 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法試驗(yàn)者,留意低溫保存。

    試驗(yàn)中為了確認(rèn)信號(hào)和背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)試驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑闡明書慣例供給的范圍進(jìn)行操作。

    規(guī)范品的制造:對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀闡明書,留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地回收其間的細(xì)胞因子。依據(jù)每批闡明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

    為了優(yōu)化靈敏度,主張過夜孵育規(guī)范品和標(biāo)本。若運(yùn)用過氧化物酶作為顯色體系,應(yīng)禁止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),如血清,主張?jiān)跇?biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。

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