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    ELISA試劑盒技術(shù)要點

    發(fā)布時間: 2013-07-31  點擊次數(shù): 1025次

               ELISA試劑盒的技術(shù)要點包括三個方面:試劑的制備、反應(yīng)條件的選擇和操作的標(biāo)準(zhǔn)化。一、試劑的制備ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。以下敘述這些試劑的原料和制備方法。
             (一)固相載體可作 ELISA試劑盒中載體的物質(zhì)很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。
             (二)抗原和抗體在 ELISA試劑盒實施過程中,抗原和抗體的質(zhì)量是實驗是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高,抗體效價高、親和力強。 ELISA試劑盒 所用抗原有三個來源:天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等,一般含有多種抗原成分,需經(jīng)純化,提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用,因此也稱提純抗原(purifiedantigen)。重組抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均為人工合成品,使用安全,而且純度高,干擾物質(zhì)少。
            (三)免疫吸附劑固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被(coating)。由于載體的不同,包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體,通常將抗原或抗體溶于緩沖液(zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液)中,加于ELISA板孔中在4℃,經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低,ELISA試劑盒固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)*覆蓋,其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會部分地吸附于固相載體表面,zui后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。

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