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    豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒使用說明書下載

    發(fā)布時間: 2016/3/21  點擊次數(shù): 802次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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     TNF-Α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知TNF-Α濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將TNF-Α和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-Α的濃度呈比例關系。

    1、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

    2、  血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

    3、  細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4、  組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

     5、  保存……如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 

    ELISA試劑盒操作注意事項: 

    1 ,試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

     2 ,實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

     3 ,不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

    4,使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

    5 ,使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

     6,底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

    8,加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

    9,按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。 

    豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒操作步驟: 

    1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

    2.   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

    3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。

    4.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

    5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

    6.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

    7.   每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。

    8.   取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。

    9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。

     

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