ELISA試劑盒中，各首要構(gòu)成試劑的挑選留意事項其間包含:
(1) 固相載體的挑選：很多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運用前均可進(jìn)行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進(jìn)行反響，調(diào)查其顯色反響是不是均一性，據(jù)此判明其吸附性能是不是良好。
(2) 包被抗體的挑選：ELISA試劑盒將抗體吸附在固相載體外表時,請求純度要好,吸附時一般請求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相一起，調(diào)查陽性標(biāo)本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量起碼的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg/ml。
(3) 酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗體系里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的挑選：ELISA試劑盒對供氫體的挑選請求是價廉、安全、有明顯地顯色反響，而自身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后，應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反響。一般底物效果時刻，以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參加。